全自动定氮仪转录后可逆性抑制细胞增殖
:结肠癌 ?9 ( ((!(#含锌指蛋白的转录因子 ?9、横纹肌肉瘤、肺癌、膀胱癌、乳癌肾母细胞瘤 ++抑癌基因根据其对细胞生长的作用，是否可逆性抑制细胞增殖、分化和诱导凋亡等功能，可分为以下两类（表 (* ’）。表 !" $#抑癌基因的功能分类抑+癌+基+因细胞生长的负调节作用抑癌基因产物与癌基因产物直接作用核内（如 !"#、$8），不可逆性抑制细胞增殖，使细胞生长、分化终止，促进细胞细胞质（如 :;(）凋亡抑癌基因对癌基因表达的负调节作用，包括转录或全自动定氮仪转录后可逆性抑制细胞增殖、生长的调节（如 ?9(）二、重要的抑癌基因及其功能 ++（一） $%基因 ++人类 $%基因位于人 (#号染色体 /(=，全部序列约 ’)) @8，含 ’2个外显子，是第一个可被分离到的抑癌基因。该基因可转录出 =A2 @8的B$:,，该 B$:,编码相对分子质量介于 ()5 C ((# )))被称之为 ! ()"的蛋白质，因首先在儿童视网母膜细胞瘤中发现，故 !()"又称为 !()" $1。!()" $1是一种核内蛋白质，有磷酸化与非磷酸化两种形式。非磷酸化形式为活性型，能促进细胞分化，抑制细胞增殖。 !()" $1的磷酸化作用随着细胞周期发生改变，在 0) D 0(期为脱磷酸化形式，磷酸化程度最低，可与 >’;形成复合物，（ FGFHIJ K6!6JK6JF6 !7LM6IJ @IJ%&6，.3<）激活后，可使>’
;与 $8蛋白分离并发挥转录因子活性，细胞立即进入 E期和增殖状态，即在 E期时 $8蛋白的磷酸化程度最强，失去对细胞分裂的抑制； N期后又开始脱磷酸化。 & ’(&和 & )*#原癌基因的表达产物对细胞由 0)期进入 0(期是必需的，而 & ’(&表达产物还是维持细胞继续生长、分化的关键因素。 !()" $1则可通过抑制 & ’(&和 & )*#等多种原癌基因的表达而抑制细胞增殖。 + + $8蛋白可与某些 3:,病毒癌基因表达蛋白结合形成复合物，使 $8蛋白丧失抑制细胞增殖的生物活性。如腺病毒的 >(,蛋白， EO=)的 9抗原和人类乳头瘤病毒 (*（ P-O(*）的 >2蛋白可与 $8蛋白结合，使其失活，而表现出癌蛋白转化细胞的能力，导致细胞异常增殖。已发现视网膜母细胞瘤、前列腺癌、食管癌、乳腺癌、骨肉瘤和小细胞肺癌等许多肿瘤均表现出 $8基因缺失或失活。将野生型 $8基因导入体外培养的上述肿瘤细胞，可使这些恶性细胞的生长受到抑制，从而证实了 $8的抑癌基因作用。 第十六章 !癌基因、抑癌基因与生长因子#"!!!（二） "#$基因 !!人类 "#$基因位于 %&号染色体短臂上，全长约 ’( )*，含 %%个外显子，转录出 ’+# )*的 ,-./，该 ,-./编码一个由 $0$个氨基酸残基组成的相对分子质量约 #$ (((的核蛋白，故此抑癌基因称为 "#$基因。在已被检测的脊椎动物中均发现有 "#$基因的存在，有些高为 %$ 2%0、%’( 2 %3$、%&’ 2 %4’、’$4 2 ’#0和 ’&% 2 ’0%。
进一步研究发现， "#$蛋白的一级结构含有 $个结构功能区：第 %至第 &#个氨基酸残基是有类似转录因子作用的酸性氨基末端区，有转录激活作用；第 %(’至第 ’0(位氨基酸残基组成疏水核心区，有结合 5./的特异序列，该区在进化上高度保守，在功能上非常重要；而位于 6端的第 $%0至 $0$位氨基酸残基为富含脯氨酸的碱性区，与其定位、结合 5./及形成四聚体等作用有关，该区有单独转化细胞的作用，有多种蛋白激酶的磷酸化位点（图 %7 ’）。在多种恶性肿瘤中均可发现有 "#$基因的缺失或变异而失去其抑癌功能。图 %7 ’! "#$蛋白的结构涂黑处为高度保守区，从 .端始，被命名为 !、"、#、$和% !!正常细胞中均含低水平的 "#$蛋白，其半衰期很短，仅 %( ,89左右。正常即野生型（ :8;< =>"?）"#$蛋白的生物学功能主要有： ! !%+抑制细胞周期 ! "#$蛋白可与 "’%基因特定序列结合促进 "’%基因的表达，而 "’%蛋白是细胞周期促进因子 6@5的抑制剂，该蛋白可通过与 65@的结合而抑制 65@的激酶活性，从而使细胞周期停止在 A%期。因此， "#$蛋白在细胞内通过促进 "’%基因的表达而抑制细胞周期。上述功能受其细胞内含量及是否磷酸化的影响。在细胞有丝分裂后， "#$蛋白的表达水平很低，到 A%期时才开始升高，而到 B期时由 65@激酶和酪氨酸激酶 "催化 "#$蛋白不同的部位发生磷酸化反应而转变为磷酸化型。 "#$磷酸化以后，其抑制 5./复制的作用增强。 ! !’+抑制某些癌基因对细胞的转化作用 !实验表明野生型 "#$蛋白可有效抑制各种癌基因，如 ! "#!、$%&基因或腺病毒 C%/对细胞的转化作用。 ! !$+监测细胞 5./损伤 !正常细胞在 5./损伤后， "#$蛋白表达急剧上调，使细胞分裂停止于 A%期，与复制因子 /相互作用参与 5./复制，启动细胞 5./修复系统。因此，在正常细胞中， "#$蛋白通过监测 5./损伤而保证细胞中遗传物质的忠实性和稳定性，防止细胞的恶性转化。 ! !3+诱发细胞凋亡 !如细胞 5./修复失
FEM8=>，OPQ）］、移码和基因重排、甲基化等多种。其中，点突变是一种重要突变形式。在人类肿瘤中，约 #(1可检测到有义点突变，约 741集中在 "、#、$和%区密码子 %&#、’34、’30、’&$和 ’4’，大部分位于第 # 24外显子突变热点区。突变后的 "#$基因所表达的产物不但失去抑癌作用，反而具有癌蛋白的功能，如野生型 "#$可与突变型 "#$蛋白结合而失活，不能结合 5./，使得一些癌基因转录失控导致肿瘤的发生。也就是说，突变型 "#$基因可被认为是癌基因。 !!（三）肾母细胞瘤基因（RS%基因） !
!人类 RS%基因位于 %%号染色体 "%$上，已克隆的 RS%是从遗传性 R8;,M瘤中分离到的一种抑癌基 #"!第三篇 C遗传信息的传递因，其功能与肾细胞分化有关。 !"#基因全长约 $% &’，其 ()*+长约 , &’，编码含 ,-$个氨基酸残基的蛋白质。 !"#基因的表达具有组织特异性，在胚胎肾上皮、胎儿睾丸和卵巢及一些造血细胞中表达，在成人肾中不表达。 !"#基因表达的蛋白产物与早期生长应答因子（ ./012 304567 0.894:8. ;/<640>) #）有相似的 ?*+结合结构域，并识别、结合同一 ?*+序列（$@ A>AAAA>A ,@）。但 =>) #可激活下游基因转录，而 !"#蛋白则作为转录抑制因子，阻抑细胞分裂增殖相关的基因转录，抑制细胞增殖。 !B1(8瘤细胞中，因 !"#基因突变，变异的 !"#基因编码的蛋白质失去了其阻抑转录的作用而引起细胞恶变。三、癌基因、抑癌基因与肿瘤的发生 CC现普遍认为肿瘤的发生是一个多因素、多阶段、多步骤、累积渐进的过程。细胞癌变的多个基因协同假说被广泛接受。该假说认为细胞癌变是多步骤、多重异常变化的复杂过程，在肿瘤的发生发展的各阶段，至少需要两个或更多个不同的癌相关基因的异常激活和（或）抑癌基因的失活，才有可能引起细胞的癌变。因细胞的增殖受多种因素的控制，需要有多种癌相关基因的协同作用才能脱离这些调控。许多实验证明，与肿瘤发生、发展密切（D/8E
